MALDImini-1迷你數(shù)字離子阱質(zhì)譜儀快速鑒定芽孢桿菌
發(fā)布時間:2020-07-17 閱讀次數(shù)：1075次
近年來，使用MALDI-TOF飛行時間質(zhì)譜進(jìn)行微生物鑒定的方法已經(jīng)普及，并廣泛用于臨床微生物鑒定、食品和藥品工業(yè)領(lǐng)域質(zhì)量控制以及微生物研究領(lǐng)域。然而這種常規(guī)方法，也有個別菌種鑒定起來有局限性，例如鑒定混合菌或孢子形成的細(xì)菌。我們嘗試換種方法來進(jìn)行微生物的鑒定。通過MS/MS檢測胰蛋白酶消化的細(xì)菌蛋白和數(shù)據(jù)庫檢索的肽段來鑒定蛋白，鎖定菌種種類，且可以從多個峰中選擇特定的峰，用于蛋白混合物鑒定。我們使用胰蛋白酶珠進(jìn)行蛋白質(zhì)的快速酶解，使用島津MALDImini-1數(shù)字離子阱MS/MS功能來鑒定芽孢桿菌。
MALDImini-1基質(zhì)輔助激光解吸電離數(shù)字離子阱質(zhì)譜儀。數(shù)字離子阱（DIT）技術(shù)是島津獨(dú)有的原創(chuàng)技術(shù)，緊湊迷你的體積，僅占用A3紙大小面積，即可實(shí)現(xiàn)MS多級的檢測。數(shù)字離子阱是由數(shù)字信號驅(qū)動的四極離子阱，使用矩形波RF捕獲離子，更容易調(diào)諧頻率，無需使用高壓即可捕獲高質(zhì)量離子。質(zhì)量范圍上限可達(dá)70000m/z，可拓展更廣泛的應(yīng)用。
將已形成芽孢的枯草芽孢桿菌取樣，按上圖工作流程制備樣品。胰蛋白酶珠2ul，在濕潤環(huán)境和37℃溫度下，30分鐘，對芽孢蛋白進(jìn)行酶解。通過使用胰蛋白酶珠可縮短通常需要數(shù)小時以上的酶解時間。酶解完成后，添加基質(zhì)溶液1ul，干燥后MALDImini-1即可開始MS，MS/MS檢測。
MS/MS離子數(shù)據(jù)庫檢索結(jié)果
通過MALDImini-1的MS/MS功能與能夠快速酶切的胰蛋白酶珠消化芽孢蛋白質(zhì)方法組合，特異性多肽序列可以對芽孢桿菌進(jìn)行快速鑒定。也有報(bào)道對食物中毒菌蠟狀芽孢桿菌和高傳染性炭疽芽孢桿菌進(jìn)行了相同的研究。
新聞稿內(nèi)容來源：島津應(yīng)用新聞NO.B112
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