島津PPSQ梯度系統(tǒng)助力多肽類藥物側(cè)鏈修飾氨基酸的序列分析
發(fā)布時(shí)間:2025-07-14 閱讀次數(shù)：161次
近年來(lái)，多肽類藥物憑借其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)逐漸成為人們關(guān)注的熱點(diǎn)，制備過(guò)程中通過(guò)對(duì)天然氨基酸側(cè)鏈進(jìn)行精準(zhǔn)修飾，成功構(gòu)建了一系列結(jié)構(gòu)新穎的多肽類藥物。因側(cè)鏈修飾氨基酸不僅展現(xiàn)出獨(dú)特的物理化學(xué)性質(zhì)，更獲得了特異性的生物活性，從而在藥物開(kāi)發(fā)中展現(xiàn)出廣闊的應(yīng)用前景。然而，如何對(duì)這些經(jīng)過(guò)側(cè)鏈修飾氨基酸進(jìn)行精準(zhǔn)序列分析，成為人們面臨的一大難題。
島津提出了使用蛋白測(cè)序儀PPSQ梯度系統(tǒng)來(lái)應(yīng)對(duì)這一難題的解決方案，實(shí)現(xiàn)了對(duì)含有側(cè)鏈修飾氨基酸進(jìn)行精確序列分析。
① 高靈敏度分析：高靈敏度的流通池可實(shí)現(xiàn)PTH氨基酸的高靈敏度檢測(cè)，從而達(dá)到微量樣品的序列分析。
② 分析穩(wěn)定性：該系統(tǒng)配備了高性能檢測(cè)器和溶劑輸送泵，具有很高的分析穩(wěn)定性，即使在微流量范圍內(nèi)，也能提供出色的泵送性能，進(jìn)而確保分析的高穩(wěn)定性。
③ 簡(jiǎn)單方便的數(shù)據(jù)分析：使用蛋白質(zhì)測(cè)序儀的專用軟件可方便地進(jìn)行序列分析所需色譜圖的后期處理、多個(gè)色譜圖的疊加以及氨基酸序列的自動(dòng)推測(cè)。
④ 符合FDA21 CFR Part 11規(guī)定：與LabSolutions DB/CS共同使用時(shí)符合FDA 21 CFR Part 11與PIC/S GMP指南中的要求。
應(yīng)用案例
PPSQ梯度系統(tǒng)在含有側(cè)鏈修飾氨基酸
序列分析中的應(yīng)用
樣品描述
組蛋白H4合成肽片段衍生物[Lys(Ac)12/16,Lys(Me3)20]-HistoneH4(1-25)-GSGSK(Biotin)（AnaSpec, Inc, CA），其中第12和第16個(gè)殘基的側(cè)鏈被乙?；ˋc）修飾，第20個(gè)殘基的側(cè)鏈被三個(gè)甲基（Me）修飾（見(jiàn)圖1）。
圖1 組蛋白H4合成肽片段衍生物
分析流程
首先，我們使用島津PPSQ梯度系統(tǒng)分析了PTH-氨基酸混合標(biāo)準(zhǔn)品。分析條件如表1所示，色譜圖如圖2所示。
其次，確認(rèn)修飾的Lys殘基的洗脫位置 (圖3) 。可以檢測(cè)出PTH-Lys (Ac) 和PTH-Lys (Me3) 的洗脫位置并且不與其他PTH衍生化天然氨基酸峰的洗脫位置重疊。
圖3 含修飾氨基酸的Edman降解色譜圖
黑色：PTH-Ala；粉色：乙酰賴氨酸(Lys(Ac))；藍(lán)色：三甲基賴氨酸(Lys(Me3))
最后將樣品50pmol干燥后進(jìn)行氨基酸序列分析 (圖4) 。結(jié)果顯示第12位、第16位的賴氨酸（Ac）以及第20位的賴氨酸（Me3）均可在各自的循環(huán)中得以鑒定。
圖4 序列分析結(jié)果
結(jié)論
通過(guò)使用島津蛋白質(zhì)測(cè)序儀PPSQ梯度系統(tǒng)，不僅能夠準(zhǔn)確鑒定合成肽中的天然氨基酸，還能有效分析側(cè)鏈修飾氨基酸序列。此技術(shù)為多肽醫(yī)藥品的鑒定提供了可靠且廣泛的應(yīng)用前景。
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