2025年版《中國藥典》人用聚乙二醇化重組蛋白及多肽制品和金培生長激素注射液分析要求及解決方案
發(fā)布時(shí)間:2025-06-30 閱讀次數(shù)：106次
人用聚乙二醇化重組蛋白及多肽制品總論簡(jiǎn)介
聚乙二醇（polyethylene，PEG）是一類由環(huán)氧乙烷聚合而成的化合物，具有一定分子量分布與親水性特點(diǎn)，呈線性、分支型及其他特殊類型的分子形態(tài)。人用聚乙二醇化重組蛋白及多肽制品是通過聚乙二醇端基的活性基團(tuán)與重組蛋白或多肽的氨基酸側(cè)鏈基團(tuán)、N端/C端的氨基或羧基發(fā)生共價(jià)反應(yīng)，修飾而成的治療性藥物。
人用聚乙二醇化重組蛋白及多肽制品具有復(fù)雜的質(zhì)量屬性，制造主要包括重組蛋白和多肽的制備、聚乙二醇修飾、修飾產(chǎn)物的分離和純化及制劑等過程。人用聚乙二醇化重組蛋白及多肽制品的質(zhì)量控制與修飾蛋白和多肽的分子大小、修飾位點(diǎn)與修飾程度、結(jié)構(gòu)特征、質(zhì)量屬性復(fù)雜程度以及生產(chǎn)工藝相關(guān)。質(zhì)量控制體系主要包括原輔材料的質(zhì)量控制、生產(chǎn)工藝的過程控制以及產(chǎn)品檢定等（表 1）。涉及重組蛋白的生產(chǎn)及質(zhì)量控制，還應(yīng)符合“人用重組DNA蛋白制品總論”及本版藥典相關(guān)各論的具體要求。
注：以下內(nèi)容根據(jù)2025年版《中國藥典》說明整理。
表1 人用聚乙二醇化重組蛋白及多肽制品檢定要求
長效生長激素作為人用聚乙二醇化重組蛋白及多肽制品的代表藥物，近年來在國內(nèi)市場(chǎng)持續(xù)擴(kuò)容，行業(yè)進(jìn)入快速成長期。目前國內(nèi)已獲批及在研的人用聚乙二醇化重組生長激素注射液包括，國內(nèi)首個(gè)獲批上市的金培生長激素（長春金賽），已提交上市申請(qǐng)的怡培生長激素（廈門特寶）和進(jìn)口隆培生長激素（維昇制藥），以及臨床試驗(yàn)中的安徽安科生長激素。
增訂各論金培生長激素注射液檢測(cè)要求
本版藥典成功收載了金培生長激素注射液，成為全球首個(gè)收載于藥典的聚乙二醇化重組蛋白制品，有效配合了“人用聚乙二醇化重組蛋白及多肽制品總論“的落地實(shí)施，為今后其它聚乙二醇修飾重組蛋白及多肽制品的標(biāo)準(zhǔn)制定提供了范本。
金培生長激素由大腸埃希菌表達(dá)、制備的人生長激素與甲氧基聚乙二醇衍生物（40kD）進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)并經(jīng)分離純化獲得的聚乙二醇單位點(diǎn)修飾人生長激素。該注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)涵蓋多個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目，下面為原液檢定項(xiàng)目（表2）和成品檢定項(xiàng)目（表3）的摘錄。
注：以下內(nèi)容根據(jù)2025年版《中國藥典》說明整理。
表2 金培生長激素注射液原液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
表3 金培生長激素注射液成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
人用聚乙二醇化重組蛋白及多肽制品分析解決方案
在聚乙二醇化重組蛋白及多肽分析領(lǐng)域，島津可提供一系列先進(jìn)的色譜、質(zhì)譜和光譜分析技術(shù)，全面覆蓋修飾蛋白和多肽的分子量測(cè)定、修飾位點(diǎn)與修飾程度分析、結(jié)構(gòu)特征以及雜質(zhì)分析等關(guān)鍵需求。尤其在總論的聚乙二醇分子量及多分散性分析方法中，明確指出可采用基質(zhì)輔助激光解吸附飛行時(shí)間質(zhì)譜（MALDI-TOF-MS）。島津公司的MALDI-TOF-MS 技術(shù)為聚乙二醇化重組蛋白及多肽制品的分析提供可靠的技術(shù)支持。
人用聚乙二醇化重組蛋白及多肽制品分析應(yīng)用案例
1 臺(tái)式MALDI-TOF-MS分析PEG6000分子量及分布
MALDI-TOF-MS是進(jìn)行聚合物分子量檢測(cè)及結(jié)構(gòu)分析的常用手段之一，不僅可以快速給出聚合物的質(zhì)量分布，單體結(jié)構(gòu)等信息，還可以有效對(duì)聚合物的端基結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析。圖 1使用島津臺(tái)式MALDI-TOF-MS，檢測(cè)出聚乙二醇6000（PEG6000）離子峰系列，并使用聚合物分析軟件 Polymerix計(jì)算分子量分布信息。
圖1 PEG6000分子量分布及單體結(jié)構(gòu)信息
2臺(tái)式MALDI-TOF-MS快速分析聚乙二醇化多肽藥物
分子量是評(píng)價(jià)聚乙二醇修飾多肽或重組蛋白藥物的重要指標(biāo)，使用MALDI-TOF-MS可檢測(cè)聚乙二醇化多肽藥物及用于修飾反應(yīng)的多肽、聚乙二醇等原料分子量，此方法操作簡(jiǎn)便、分析速度快，可作為多肽藥物修飾產(chǎn)物確認(rèn)、快速判斷聚乙二醇修飾效果，以及原料質(zhì)量控制的參考（圖 2）。
圖2 PEG化多肽質(zhì)譜圖
3 SEC-UV-RI串聯(lián)雙檢測(cè)器測(cè)定聚乙二醇化人生長激素平均修飾率
聚乙二醇 (PEG) 平均修飾率是PEG化蛋白類藥物表征與質(zhì)量控制中的關(guān)鍵屬性，本方法基于“PEG化蛋白的示差信號(hào)及紫外信號(hào)等于該偶聯(lián)蛋白中PEG和蛋白部分各自處于未偶聯(lián)狀態(tài)單獨(dú)存在時(shí)所產(chǎn)生相應(yīng)信號(hào)之和”的基本假設(shè)，成功建立了基于分子排阻色譜紫外示差雙檢測(cè)器串聯(lián)技術(shù)的PEG化hGH (怡培生長激素) 平均修飾率測(cè)定方法（圖 3）。
圖3 島津SEC-UV-RI串聯(lián)雙檢測(cè)器分析怡培生長激素注射液分析圖譜
怡培生長激素檢測(cè)波長為280 nm時(shí)，對(duì)PEG-GH中PEG部分被認(rèn)為無響應(yīng), 所產(chǎn)生的UV信號(hào)可以全部歸結(jié)于hGH蛋白部分。本藥典收載的金培生長激素中連接GH 蛋白和兩條20 kDa PEG鏈的連接子與怡培生長激素相似, 理論上可以采用相同的酸水解法進(jìn)行測(cè)定。
參考文章：藥學(xué)學(xué)報(bào) Acta Pharmaceutica Sinica 2024, 59(12): 3367?3373
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